摘要：

为研究LEM4基因在肿瘤发生发展中的生物学功能，采用CRISPR/Cas9技术，在小鼠基因组的Rosa26位点插入CAG-loxP-STOP-loxP-hLEM4-3×FLAG-IRES-EGFP，建立了Rosa26-LEM4定点转基因小鼠模型。依据小鼠Rosa26位点序列设计合成gRNA、构建含同源序列和目的序列CAG-loxP-STOP-loxP-hLEM4-3×FLAG-IRES-EGFP的插入序列，和Cas9核酸酶mRNA共同注射入小鼠的受精卵中并获得敲入小鼠后代,经Southernblot鉴定、以及PCR扩增插入序列后的序列分析鉴定出F₀首建鼠，F₀首建鼠与野生型小鼠杂交后获得基因型为Rosa26-LEM4^flox-LSL/wt的F₁代小鼠。Rosa26-LEM4^flox-LSL/wt小鼠自交后获得Rosa26-LEM4^{flox-LSL/flox-LSL}基因型小鼠。Rosa26-LEM4^{flox-LSL/flox-LSL}小鼠与EIIa-cre工具鼠杂交后获得表达人LEM4蛋白的Cre^+/-；Rosa26-LEM4^flox-LSL/wt小鼠模型。该模型的建立为研究LEM4的肿瘤生物学功能提供了材料和思路。

关键词: LEM4, Rosa26位点, 定点敲入