摘要：

小鼠单倍体胚胎干细胞（haESC）是来源于单倍体胚胎囊胚时期的内细胞团来，在体外合适培养条件下建立的一种细胞。相比于二倍体细胞，haESC由于只具有一套染色体，能够有效展示隐性基因或突变表型，因而可以直接地筛选出隐性突变，在遗传学筛选中具有重要价值。但是小鼠haESC处于一种不稳定的状态，在体外培养或分化过程中，趋向于加倍为二倍体细胞。为了长期培养haESC，需要定期地利用Hoechst 33342活细胞染色结合细胞分选技术分选出G1期细胞以清除二倍体细胞，这严重限制了haESC在遗传学上的应用。因此探究haESC二倍体化的机制对其在遗传学筛选和隐性表型方面的研究至关重要。本研究借助FUCCI （fluorescent, ubiquitination-basedcell cycle indicator）报告系统，实现了细胞周期从G1期向S期转变的可视化，因此可以成功分离单倍体和二倍体细胞。之后，利用了慢病毒靶向激酶组（kinome）的sgRNA文库在小鼠haESC中构建了激酶组突变的haESC突变体文库。通过长期培养和多次分选此突变体文库，筛选出多个潜在的调控haESC二倍体化的基因。