摘要：

基于网络药理学、转录基因组学技术，结合分子对接、分子动力学模拟及实验验证，探讨青藤碱治疗膀胱癌的作用机制。在TCMSP数据库中搜索青藤碱的靶点，通过GeneCards、OMIM、PharmGkb、DrugBank、Malacards、DisGeNET共6个疾病数据库搜索膀胱癌靶点。分析青藤碱靶点和膀胱癌靶点的交集靶点（治疗靶点），在String平台上构建交集靶点的蛋白质相互作用（PPI）网络。使用Cytoscape 3.7.1软件构建“药物-成分-靶点-疾病”网络，在DAVID数据库中进行GO和KEGG富集分析。整合膀胱癌患者的差异表达基因（differentially expressed genes， DEGs）与交集靶点，筛选共有靶点（关键靶点）并进行功能分析。采用AutoDock软件对青藤碱与关键靶点进行分子对接，随后用Gromacs进行分子动力学模拟，观察靶蛋白中的相互作用和构象变化。最后采用qRT-PCR和Western blot验证核心靶点。结果显示:①共筛选118个药物靶点、6 395个疾病靶点和86个治疗靶点;②获得PPI网络和“药物-成分-靶点-疾病”网络，分析治疗靶点，主要涉及Th17细胞分化通路、PI3K-Akt信号通路、EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药性通路、IL-17信号通路等多条通路。③转录基因组学分析获得1 175个膀胱癌相关DEGs，与治疗靶点进行交集，获得12个关键基因，涉及病毒感染、TNF及IL-17信号通路等（P<0.05）。④分子对接结果表明，青藤碱与关键靶点之间存在很强的结合亲和力，分子动力学模拟证实了青藤碱与这些靶点的稳定结合;⑤qRT-PCR结果显示，青藤碱显著地下调SCD和MIF mRNA表达（P<0.05），显著上调PTGS1 mRNA表达（P<0.05）。 Western blot结果证实青藤碱下调膀胱癌细胞株T24中SCD和MIF蛋白的表达，上调PTGS1蛋白的表达。青藤碱可以通过多靶点、多通路协同发挥治疗膀胱癌的作用。