摘要：

利用分子生物学、转录组学、系统生物学的方法研究狼毒宁B（CHB）在体外调控A172细胞发生RCD的分子机制，并探讨不同RCD机制之间的相互联系。应用CCK-8实验、Annexin V-FITC/PI实验、JC-1实验、ROS实验、MDA含量测定、GSH含量测定，检测CHB对A172细胞活力、线粒体膜电位、活性氧及氧化应激的影响；用Westernblot检测各个RCD机制关键蛋白的表达水平；检测CHB联合铁死亡/自噬激动剂/抑制剂后各个RCD机制关键蛋白表达水平；通过转录组学和模拟基因敲除获取CHB调控A172细胞的关键信号通路。结果发现，CHB作用于A172细胞，各RCD发生的特点为:呈时间-浓度依赖的抑制细胞活力；诱导细胞发生凋亡，但以早期凋亡为主；自噬流被活化，但下游降解途径受阻，造成自噬流失调，铁死亡可加剧这一进程；NRF2为自噬流活化的下游机制，保护细胞免受氧化应激的损伤；p62主要参与了以NCOA4激活为主的铁自噬；转录组学和模拟基因敲除同时筛选到MAPK通路。综上，CHB可导致A172细胞发生以NCOA4激活为主的铁自噬和氧化应激，在这一过程中，同时发生了自噬流失调及下游的抗氧化机制，部分保护A172细胞细胞的细胞活力，MAPK通路可能为关键的信号通路。